Javiersinmiedo
Madmaxista
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Analisis de la presencia de RNA mensajero codificante para la proteína Spike en viales de banderilla Moderna y Pfizer para la producción de inmunidad contra nCoViD 2019
Dado que los estudios científicos demostraron que el SARS-CoV-2 entran a las células a través de la unión de la enzima convertidora de angiotensina 2 (ACE2), presente en la membrana celular, con la proteína viral Spike (ver Fig1) las nuevas banderillas se construyen con secuencias genéticas que codifican para la producción de la misma dentro de las células humanas con el fin que ellas actúen como antígenos generadores de inmunidad.
Figura 1
Como se muestra en el Figura 1 la presencia de la proteína Spike al unirse a la ACE2 soluble interfiere con la producción de angiotensina 1-7 que contraresta los procesos inflamatorios, coagulatorios, de vaso constricción, de retención de líquidos y sodio, etc, de la angiotensina 2. Es por ello que es crítico desde la perspectiva sanitaria conocer la presencia de estas secuencias genéticas y su concentración en las banderillas que según los fabricantes las contienen Fig 2.
Conociendo la secuencia genética que codifica la proteína Spike se diseñó cebadores (primers) que mediante la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) posterior a la tras*cripción del material ARN a ADN mediante la tras*criptasa reversa permiten amplificar tales secuencias y luego observarlas mediante el sistema de electroforesis de agarosa.
Figura 2
Metodología:
Viales de banderillas analizados (Fig.3):
1- Moderna (Spike vax) 0,20 mg/ml - mRNA Biontech lote 940-915 - Venc 08/06/2022
2- Pfizer Biontech - Lote PAA173452 - NDC 59267-1000-1 - FN167207/2022
Figura 3: viales a analizados
Extracción de material genéticos y amplificación:
Los viales estudiados fueron provistos por el Dr. Martin Monteverde, a fin de analizar en ellos la presencia de secuencias nucleotídicas asociadas a la proteína Spike del SARSCoV2.
El ARN de los viales fueron aislados mediante la técnica descripta por Chomczynski, 1993 y trancripto a ADN mediante M-MLV Reverse tras*criptase Promega. Posteriormente se produce la amplificación mediante polimerasa GoTaq® G2 DNA Polymerase Promega y los primers mostrados en la Fig. 4 que amplifica un fragmento de 410 bp
El análisis de la presencia de los fragmentos se realizó mediante electroforesis en gel de agarosa 1,5 % y tinción con bromuro de ethidium.
Figura 4: secuencia nucleotídica proteína spike SARSCoV2
Resultados:
En la Figura 5 se puede observar los resultados obtenidos en la electroforesis de agarosa 1,5 % del material extraido de los viales (Fig. 3) amplificados con las secuencias de primers que corresponden a un fragmento de 410 bp de la proteína Spike. Este fragmento no se observa en la electroforesis de los productos amplificados. NO se han podido obtener resultados positivos que evidencien en estos viales presencia de material genómico correspondiente a la proteína Spike.
Figura 5: Electroforesis en gel de agarosa 1,5 % de material amplificado a partir de extracción de ARN de los viales Moderna y Pfizer Biontech
CONCLUSIONES
Los resultados obtenidos no evidencian en los viales analizados la presencia de material genómico correspondiente a la secuencia nucleotídica de la proteína Spike. Este resultado NO habilita a extraer una conclusión definitiva, dado el número de viales analizados y NO debe ser interpretado como ausencia de RNA mensajero en las banderillas de las marcas mencionadas. Si sugiere la necesidad de realizar un estudio amplio, científico y público sobre el contenido de las mismas en un número estadísticamente significativo de viales y de lotes a estudiar.
BIBLIOGRAFIA
1- Chomczynski, P. 1993 A reagent for the single-step simultaneous isolation of RNA, DNA and proteins from cell and tissue samples. Biotechniques 15: 532–537.
Juan Carlos Garberi
Dr. En Ciencias Químicas
Biologo e Inmunologo Molecular
Dado que los estudios científicos demostraron que el SARS-CoV-2 entran a las células a través de la unión de la enzima convertidora de angiotensina 2 (ACE2), presente en la membrana celular, con la proteína viral Spike (ver Fig1) las nuevas banderillas se construyen con secuencias genéticas que codifican para la producción de la misma dentro de las células humanas con el fin que ellas actúen como antígenos generadores de inmunidad.
Figura 1
Como se muestra en el Figura 1 la presencia de la proteína Spike al unirse a la ACE2 soluble interfiere con la producción de angiotensina 1-7 que contraresta los procesos inflamatorios, coagulatorios, de vaso constricción, de retención de líquidos y sodio, etc, de la angiotensina 2. Es por ello que es crítico desde la perspectiva sanitaria conocer la presencia de estas secuencias genéticas y su concentración en las banderillas que según los fabricantes las contienen Fig 2.
Conociendo la secuencia genética que codifica la proteína Spike se diseñó cebadores (primers) que mediante la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) posterior a la tras*cripción del material ARN a ADN mediante la tras*criptasa reversa permiten amplificar tales secuencias y luego observarlas mediante el sistema de electroforesis de agarosa.
Figura 2
Metodología:
Viales de banderillas analizados (Fig.3):
1- Moderna (Spike vax) 0,20 mg/ml - mRNA Biontech lote 940-915 - Venc 08/06/2022
2- Pfizer Biontech - Lote PAA173452 - NDC 59267-1000-1 - FN167207/2022
Figura 3: viales a analizados
Extracción de material genéticos y amplificación:
Los viales estudiados fueron provistos por el Dr. Martin Monteverde, a fin de analizar en ellos la presencia de secuencias nucleotídicas asociadas a la proteína Spike del SARSCoV2.
El ARN de los viales fueron aislados mediante la técnica descripta por Chomczynski, 1993 y trancripto a ADN mediante M-MLV Reverse tras*criptase Promega. Posteriormente se produce la amplificación mediante polimerasa GoTaq® G2 DNA Polymerase Promega y los primers mostrados en la Fig. 4 que amplifica un fragmento de 410 bp
El análisis de la presencia de los fragmentos se realizó mediante electroforesis en gel de agarosa 1,5 % y tinción con bromuro de ethidium.
Figura 4: secuencia nucleotídica proteína spike SARSCoV2
Resultados:
En la Figura 5 se puede observar los resultados obtenidos en la electroforesis de agarosa 1,5 % del material extraido de los viales (Fig. 3) amplificados con las secuencias de primers que corresponden a un fragmento de 410 bp de la proteína Spike. Este fragmento no se observa en la electroforesis de los productos amplificados. NO se han podido obtener resultados positivos que evidencien en estos viales presencia de material genómico correspondiente a la proteína Spike.
Figura 5: Electroforesis en gel de agarosa 1,5 % de material amplificado a partir de extracción de ARN de los viales Moderna y Pfizer Biontech
CONCLUSIONES
Los resultados obtenidos no evidencian en los viales analizados la presencia de material genómico correspondiente a la secuencia nucleotídica de la proteína Spike. Este resultado NO habilita a extraer una conclusión definitiva, dado el número de viales analizados y NO debe ser interpretado como ausencia de RNA mensajero en las banderillas de las marcas mencionadas. Si sugiere la necesidad de realizar un estudio amplio, científico y público sobre el contenido de las mismas en un número estadísticamente significativo de viales y de lotes a estudiar.
BIBLIOGRAFIA
1- Chomczynski, P. 1993 A reagent for the single-step simultaneous isolation of RNA, DNA and proteins from cell and tissue samples. Biotechniques 15: 532–537.
Juan Carlos Garberi
Dr. En Ciencias Químicas
Biologo e Inmunologo Molecular
